發酵罐菌種實驗室種子制備
發布時間:2013-11-13 8:32
實驗室種子制備包括瓊脂斜面培養、固體培養基擴大培養和搖瓶液體培養等,目的是為種子罐提供種子。
保藏在砂土管或冷凍干燥管中的菌體在無菌條件下接入適合于孢子萌發或菌絲生長的斜面培養基中培養,成熟后可挑選正常的孢子再一次接入試管斜面。根據菌種的生理生長特性不同,提供給種子罐的菌種狀態也不同,分為:
①對于產孢子能力強或孢子發芽、生長繁殖快的菌種,可采用固體培養基培養孢子,孢子可直接作為種子罐的種子。如青霉素產生菌產黃青霉菌。
②對于產孢子能力不強或孢子發芽慢的菌種,可以用搖瓶液體培養法。將袍子接入液體培養基的搖瓶中,振蕩培養,獲得菌絲體作為種子。如產鏈霉素的灰色鏈霉菌。
③對于不產孢子的細菌,如生產谷氪酸的產生菌,谷氨酸棒桿菌一般采用斜面營養細胞保藏法,4 ℃冰箱保藏的斜面菌種用固體斜面活化培養后,即呵接入茄子瓶斜面或三角瓶液體培養,此培養物即可作為種子罐的種子。
④酵母菌一般保藏在麥芽汁瓊脂斜面培養基上,于4℃冰箱保藏,擴大培養可逐級擴大到10 ml液體試管、250 ml 三角瓶、1000 ml 三角瓶,即可作為100 L麥芽汁種子罐的種子。
固體斜面菌種培養
固體斜面試管培養在無菌室內進行,菌種室需經常清掃和消毒滅菌,以防止雜菌和噬菌體的污染。生產上使用的斜面菌種一般只移接三次,每次可移接數支,分別擴大培養后使用,不宜多次移種,避免菌種的自然變異引起的菌種不純。因此,菌種的分離純化工作是企業經常性的工作。斜面培養的培養基和培養條件根據所用生產菌種的不同而異。
固體培養基擴大培養
固體培養基擴大培養包括茄子瓶、克氏瓶、培養皿、蘑菇瓶、一三角瓶、瓷盤等培養方式。可以進行搖瓶培養或靜置培養。
搖瓶液體培養
三角瓶放到搖瓶機或搖床上,振蕩或回旋培養,搖瓶通氣最的大小取決于搖瓶機型式,轉數、振程(或偏心距)、三角瓶容量、裝料量。搖瓶培養是為了在振蕩過程中溶入較多的氧,以供微生物在生長繁殖過程中氧的消耗。實驗室階段的培養過程中,因為菌種和培養物的量較少,可以在無菌狀態下直接接入。
本文參考《發酵工程原理及技術》一書。
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