高溫消泡劑與分離提純之鹽析法

發布時間：2012-12-11 14:42

微生物酶的提取方法，因酶的結合狀態與穩定性的不同，應用部門對產品的純度要求不同，而有一定的區別。如果提取到的酶是一種可溶于水的復雜混合物，則需要進一步加以純化。適用于大生產的提純方法是以降低成本、提高效能而同時又提高產品純度和質量為前提，事先應當經小試驗規模充分對比，從中加以挑選。理想的提純方法應滿足兩個條件，即比活性的提高與總活性的回收高，但實際上往往難以兼得。鹽析劑中性鹽的選擇：MgSO4,(NH4)2SO4,Na2SO4，NaH2PO4是常用的鹽析用中性鹽。其鹽析蛋白質的能力隨蛋白質的種類而不同，但一般說來這種能力按上述順序依次增大。一般可以說含有多價陰離子的中性鹽與高溫消泡劑其鹽析效果好。但實際上(NH4)2SO4是最多用的鹽析劑，這是因為它的溶解度在較低溫度下也是相當高的。有的酶只有在低溫下穩定，而低溫下Na2SO4，NaH2PO4的溶解度很低，常常不能達到使這種酶鹽析的濃度。鹽析劑用量的決定：不同的酶使之鹽析沉淀的鹽析劑與高溫消泡劑用量是不同的，隨共存的雜質的種類和數量而有所差異。因此，適當的使用量只能根據實驗決定，并根據數據可以繪制出鹽析曲線。 pH和溫度的影響：蛋白質的溶解度在無鹽存在下，以在等電點時為最小，在稀鹽狀態時大致也是這樣。但在高濃度的中性鹽溶液與高溫消泡劑中，原有蛋白質溶液pH的影響不大，實際上溶液最終的pH為鹽析劑與高溫消泡劑所決定。在無鹽或稀鹽溶液中，溫度低、蛋白質的溶解度也低，但在高溫消泡劑與高濃度鹽溶液中，溫度高則蛋白質的溶解度反而低。因此，一般說來鹽析時不要降低溫度，除非這種酶不耐熱。分部鹽析法：不同的酶或其它蛋白質在同一中性鹽溶液中溶解度是不同的。劑用這一特性，先后添加不同濃度的中性鹽，就可能把其中的不同酶或雜質蛋白分別鹽析出來。為了保證這種可能性，需要做出目的酶的鹽析曲線，先以低的中性鹽濃度除去大部分的雜蛋白質，此時目的酶則很少沉淀下來。在分離沉淀物之后，在濾液中再補加一定量的同一中性鹽與高溫消泡劑，使達到沉淀目的酶所需鹽析劑與高溫消泡劑的濃度，此時目的酶基本上全部析出。鹽析法的優點是在常溫沉淀過程中不會造成酶的失活，沉淀物在室溫下長時間放置也不會失活，在沉淀酶的同時夾帶沉淀的非蛋白質雜質少，而且適用于任何酶的沉淀。它的缺點是沉淀物中含有大量的鹽析劑和高溫消泡劑。鹽析沉淀物的收集一般不常用離心分離法，而用傾出法。本文參考《發酵工程原理與技術》一書。

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